Implication of nNOS in the Enlargement of AChR Aggregates but Not the Initial Aggregate Formation in a Novel Coculture Model

Tsan-Ju Chen; Shun-Sheng Chen; Ru-En Wu; Dean-Chuan Wang; Chuang-Hao Lin

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doi:DOI 号

来源数据

P129 - 138

医药卫生 > 基础医学

DOI： 10.4077/CJP

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Implication of nNOS in the Enlargement of AChR Aggregates but Not the Initial Aggregate Formation in a Novel Coculture Model

Tsan-Ju Chen ； Shun-Sheng Chen ； Ru-En Wu ； Dean-Chuan Wang ； Chuang-Hao Lin

The Chinese Journal of Physiology ； 48 卷 3 期 (2005 / 09 / 30) ， P129 - 138

英文

neuromuscular junction ； AChR aggregation ； nitric oxide ； coculture

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摘要 │ 参考文献 (41) │ 国际计量

并列摘要〈TOP〉

The aggregation of nicotinic acetylcholine receptors (AChRs) is an early hallmark of the formation of neuromuscular junction (NMJ), and nitric oxide is recently known to play an important role. In many NMJ studies, nerve-muscle coculture model was used, and NG108-15 cells, a neuroblastoma × glioma hybrid cell line, were the most frequently used nerve cells. However, possible contributions from glial cells could not be excluded. In this study, Neuro-2a neuroblastoma cells were used instead to coculture with myotubes, and the relationship between AChR aggregation and spatiotemporal expression and activation of nNOS (neuronal nitric oxide synthase) was examined. Upon coculture, AChR aggregates were observed by FITC-conjugated α-bungarotoxin, and double labeling of AChRs and neurofilament showed that the neurites of a Neuro-2a cell innervated several myotubes. After treating the cocultures with single dose of L-NAME at the end of 1 day coculturing, only slight effect on AChR aggregation could be found indicating that nNOS is not related to the initial formation of AChR aggregates. In contrast, when L-NAME treatment was given at the end of a 3-day coculturing, the day just before reaching the maximum extent of AChR aggregation, new AChR aggregates were hardly formed and the preformed AChR aggregates were even dispersed indicating that the enlargement of AChR aggregates is highly dependent on the nNOS activity. Double-labeling study of nNOS and AChR further showed that the coupling of membranous nNOS to regions nearby the AChR aggregates was essential for the enlargement of AChR aggregates. These results not only revealed the spatiotemporal relationship between AChR aggregation and nNOS activity but also verified the feasibility and usefulness of using Neuro-2a cells in a coculture model.

参考文献 ( 41 ) 〈TOP〉

Akhand, A.A.,Pu, M.,Senga, T.,Kate, M.,Suzuki, H.,Miyata, T.,Hamaguchi, M.,Nakashima I.(1999).Nitric oxide controls src kinase activity through a sulfhydryl group modification-mediated Tyr-527-independent and Tyr-4 16-linked mechanism.J. Blot. Chem,274,25824-25826.
Apel, E.D.,Roberds, S.L.,Campbell, K.P.,Merlie, J.P.(1995).Rapsyn may function as a link between the acetylcholine receptor and the agrin-binding dystrophin-associated glycoprotein complex.Neuron,15,115-126.
Blottner, D.,Luck, C.(2001).Just in time and place: NOS/NO system assembly in neuromuscular junction formation.Microsc. Res. Tech,55,171-180.
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Borges, L.S.,Lee, Y.,Ferns, M.(2002).Dual role for calcium in agrin signaling and acetylcholine receptor clustering.J. Neurobiol,50,69-79.

国际计量

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