Cloning, Expression and Purification of Human S-Adenosylmethionine Decarboxylase Gene α Subunit

Lei Gong; Bing Zhang; Yan Zhang; Hai-Yan Hu; Zhi-Yi Zhao; Xian-Xi Liu

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doi:DOI 号

来源数据

P29 - 33

医药卫生 > 基础医学

DOI： 10.4077/CJP

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Cloning, Expression and Purification of Human S-Adenosylmethionine Decarboxylase Gene α Subunit

Lei Gong ； Bing Zhang ； Yan Zhang ； Hai-Yan Hu ； Zhi-Yi Zhao ； Xian-Xi Liu

The Chinese Journal of Physiology ； 50 卷 1 期 (2007 / 02 / 28) ， P29 - 33

英文

S-adenosylmethionine decarboxylase ； prokaryotic expression

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摘要 │ 参考文献 (19) │ 被引用文献 (1) │ 国际计量

并列摘要〈TOP〉

S-adenosylmethionine decarboxylase (SAMDC) is an essential enzyme for the synthesis of spermidine and spermine in the biosynthetic pathway of polyamines. The total RNA was extracted from colon cancer tissue and amplified by reverse-transcription PCR with two primers, which span the coding region of SAMDC α subunit. Clone vector pMD18-T-SAMDC-α was successfully constructed by using T-A clone technique. pMD18-T-SAMDC-α and pTriEx-4 were digested by NcoⅠ and XhoⅠ double enzymes. The purified SAMDC-α fragment was subcloned into the expression vector pTriEx-4 to construct the prokaryotic expression plasmid pTriEx-4-SAMDC-α. The recombinant plasmid pTriEx-4-SAMDC-α was transformed into competence E. coli JM109 (DE3). The bacterium was induced by IPTG and its lysates were loaded directly onto SDS-PAGE. An approximately 32 kDa exogenous protein was observed on the SDS-PAGE. The protein was verified by Western blot with anti His•Tag monoclonal antibody. The fusion protein including 6×His•Tag was purified by Ni-NTA chromatographic column. Then, the purified protein can be applied for further research of the immunity of SAMDC.

参考文献 ( 19 ) 〈TOP〉

Canizares, F.,Salinas, J.,de las Heras, M.,Diaz, J.,Tovar, I.,Martinez, P.,Penaliel, R.(1999).Prognostic value of ornithine decarboxylase and polyamines in human breast cancer: correlation with clinicopathologic parameters.Clin. Cancer Res.,5,2035-2041.
Faaland, C.A.,Thomas, T.J.,Balabhadrapathruni, S.,Langer, T.,Shirahata, A.,Gallo, M.A.,Thomas, T.,Main, S.(2000).Molecular correlates of the action of bis(ethyl) polyamines in breast cancer cell growth inhibition and apoptosis.Biochem. Cell Biol.,78,415-426.
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Hu, H.Y.,Liu, X.X.,Jiang, C.Y.,Zhang, Y.,Wang, X.M.,Liu, S.L.,Geng, Z.,Lu, Y.,Zhang, B.,Sun, A.H.(2004).Development and application of human ornithine decarboxylase polyclonal antibody.Chin. J. Curr. Adv. Gen. Surg.,7,26-30.
Hu, X.,Washington, S.,Verderame, M.F.,Demers, L.M.,Mauger, D.,Manni, A.(2004).Biological activity of the S-adenosylmethionine decarboxylase inhibitor SAM486A in human breast cancer cells in vitro and in vivo.Int. J. Oncol.,25,1831-1838.

被引用文献 ( 1 ) 〈TOP〉

Tzang, Bor-Show,Tsai, Chun-Chou,Huang, Chih-Yang,Hsu, Tsai-Ching,Hsu, Gwo-Jong,Chiu, Chun-Ching(2011).Effects of Human Parvovirus B19 on Expression of Defensins and Toll-Like Receptors.中国生理学杂志,54(5),65-74.

国际计量

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